生物制藥設(shè)備清潔驗(yàn)證中復(fù)雜化合物的回收率

目的

為表明Sievers* 總有機(jī)碳（TOC）分析儀，對(duì)具有高分子量與復(fù)雜化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物的回收能力，本研究中的這些化合物，通常被認(rèn)為難于被非燃燒/紅外檢測(cè)的TOC儀器氧化并準(zhǔn)確檢測(cè)。

 

結(jié)論

Sievers  TOC分析儀回收標(biāo)準(zhǔn)溶液中這些化合物的能力非常好。牛血清白蛋白（BSA）、頭孢他啶（CP） 、葡聚糖硫酸酯（DS ） 、牛血紅蛋白（Heme）和人胰島素（HI），以平均95％被回收。本研究為清潔驗(yàn)證的非專屬但高度靈敏的TOC分析方法提供支持，特別是本案例中的UV/過(guò)硫酸鹽方法。此應(yīng)用具有巨大的價(jià)值，因?yàn)榕c其他方法相比，該技術(shù)具有低水平的檢測(cè)限（ppb）、分析時(shí)間快并且操作成本低。

討論

國(guó)際醫(yī)藥科技協(xié)會(huì)（PDA）列出了用于驗(yàn)證和監(jiān)控清潔的許多合適的物理、化學(xué)和生物技術(shù)，其中包括針對(duì)特殊分子的試驗(yàn)以及許多非特定試驗(yàn)。在查看性能比較和參考之后，PDA特別提到，“典型的清潔驗(yàn)證研究可使用pH、電導(dǎo)率、總有機(jī)碳、洗滌劑試驗(yàn)，若有多產(chǎn)品設(shè)備，則使用產(chǎn)品專用的試驗(yàn)?！睉?yīng)比較分析的精度、準(zhǔn)確度、檢測(cè)限、定量限、選擇性、線性、范圍和靈敏度。進(jìn)行了許多科學(xué)研究以評(píng)測(cè)性能，比如符合的通用方法：高性能液相色譜（HPLC）、薄層色譜（TLC）、UV光譜、總有機(jī)碳（ TOC ） 、酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定（ELISA）、膠體電泳和電導(dǎo)率等常用方法。藥物殘留、賦形劑、清洗劑殘留和反應(yīng)副產(chǎn)物都顯示了該方法的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。

仔細(xì)選擇清潔驗(yàn)證（CV）分析的儀器應(yīng)是任何清潔驗(yàn)證主計(jì)劃實(shí)施的一部分。TOC的使用，應(yīng)該是僅有的幾種類型 之一，以其氧化方式不同為特點(diǎn)?？墒褂萌紵隣t、加熱的過(guò)硫酸鹽溶液或者紫外燈存在下的過(guò)硫酸鹽溶液進(jìn)行氧化。Sievers Model 使用UV/過(guò)硫酸鹽氧化方法，并使用其專利膜電導(dǎo)測(cè)量技術(shù)測(cè)定清潔驗(yàn)證樣品的TOC濃度。

本研究檢驗(yàn)牛血清白蛋白（BSA）、頭孢他啶（CP） 、葡聚糖硫酸酯（DS ） 、牛血紅蛋白（Heme）和人胰島素（HI）在多種濃度下的回收率。表1所示為回收數(shù)據(jù)一覽表。

所研究化合物的平均回收率為95.9％，范圍在73％至129％之間?；衔锘厥章屎芎们以陬A(yù)料之中，然而葡聚糖硫酸酯的回收率范圍在118％至131％之間。 在此研究時(shí)，還不清楚這么高回收率的引起原因，但對(duì)化合物進(jìn)行進(jìn)一步查看，以便找到可能的解釋。值得注意的是，葡聚糖硫酸酯以及其他的所有化合物的回收率線性在濃度范圍內(nèi)非常好。這使得可通過(guò)應(yīng)用相關(guān)的曲線方程方便地預(yù)測(cè)未知濃度的樣品。圖1是包含各化合物線性的圖，而各公式在表2中。所研究各化合物的線性非常好。

 

 

小結(jié)

當(dāng)進(jìn)行回收這組生物醫(yī)藥行業(yè)常用的大分子時(shí)，Sievers TOC分析儀進(jìn)行得很好。表明UV/過(guò)硫酸鹽法可用于將化合物中所含的碳氧化為CO2，進(jìn)行量化。 許多醫(yī)藥相關(guān)的設(shè)備已經(jīng)成為非特定但高靈敏度TOC分析儀用于清潔驗(yàn)證的很好案例，請(qǐng)注意與其他方法相比，該技術(shù)檢測(cè)含量低（ppb）、分析時(shí)間快并且成本低，而且可檢測(cè)眾多碳基殘留。

材料和技術(shù)

試劑

1. 6M的磷酸溶液

在含有1L低TOC水的5L容量瓶中加入2 L 85％的磷酸，并用低TOC水稀釋到體積刻度。

2. 15％過(guò)硫酸銨溶液

在5L低TOC水中溶解750 g過(guò)硫酸銨。

3. 低TOC水。

材料

1. 牛血清白蛋白（BSA）：Fluka已測(cè)定@54.45%碳。

2. 人胰島素（HI）：Fluka已測(cè)定@44.1%碳。

3. 頭孢他啶（CP）：SmithKline Beecham已測(cè)定@41.5%碳。

4. 葡聚糖硫酸酯（DS）：Aldrich已測(cè)定@18.56 %碳。

5. 牛血紅蛋白（Heme）：Aldrich已測(cè)定@49.87 %碳。

6. 容量瓶和移液管（使用稀釋的Steris CIP 100?溶液清洗并使用20 次低TOC 水漂洗）。

儀器

1．Sievers 總有機(jī)碳分析儀

2．Sievers TOC 自動(dòng)進(jìn)樣器

參考資料

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